Emx1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402711-ACT

EMX1 codifica il fattore di trascrizione homeobox Emx1, un regolatore che si lega al DNA e contribuisce a definire l’identità regionale e i programmi di lineage neuronale durante lo sviluppo del prosencefalo e della corteccia umani. Emx1 influenza reti geniche che controllano la proliferazione dei progenitori, la differenziazione neuronale e la migrazione, integrandosi con vie di segnalazione dello sviluppo quali Wnt, FGF e Notch per modellare il patterning del neuroepitelio. Programmi trascrizionali associati a EMX1 deregolati sono stati collegati ad alterazioni delle traiettorie di neurosviluppo, rendendo EMX1 un locus utile per studiare i meccanismi di formazione dei circuiti corticali e di specificazione del destino cellulare. Nella ricerca biomedica, EMX1 funge da fattore di trascrizione modello per analizzare il controllo enhancer–promoter, la dinamica degli stati della cromatina e l’espressione genica ristretta alla linea cellulare nei sistemi neurali.

Emx1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EMX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Emx1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EMX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EMX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Emx1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EMX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Emx1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Emx1 nelle cellule tumorali con espressione di EMX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.