EMR1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400698-LAC

ADGRE1 codifica EMR1, un recettore di adesione accoppiato a proteine G (GPCR) della famiglia EGF-TM7, strettamente associato alla biologia delle cellule mieloidi e al riconoscimento del microambiente immunitario. EMR1 partecipa alle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice tramite i suoi domini extracellulari tipo EGF e può influenzare processi quali l’adesione leucocitaria, l’infiltrazione nei tessuti e la polarizzazione funzionale dei macrofagi. Nell’ambito di programmi più ampi di segnalazione mediata da GPCR e dell’immunità innata, EMR1 è comunemente utilizzato come marcatore per profilare gli stati della linea mieloide e il rimodellamento infiammatorio nei tessuti. Un’attivazione mieloide disregolata e firme associate a EMR1 alterate sono rilevanti per studi su infiammazione cronica, biologia dei macrofagi associati al tumore e patologie fibrotiche o immuno-mediate.

Le particelle di attivazione lentivirale EMR1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ADGRE1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EMR1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ADGRE1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EMR1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ADGRE1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.