EMMPRIN/CD147 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419369-ACT

Mouse Bsg codifica EMMPRIN/CD147, una glicoproteina della superfamiglia delle immunoglobuline ampiamente espressa che regola le interazioni cellula–cellula, il rimodellamento della matrice extracellulare e l’accoppiamento metabolico in molteplici tessuti. CD147 promuove l’induzione delle metalloproteinasi della matrice e supporta il traffico dei trasportatori di monocarbossilati (MCT1/MCT4), collegando il trasporto del lattato alla riprogrammazione glicolitica e alla dinamica del microambiente tissutale. Partecipa a processi quali il traffico leucocitario, la segnalazione angiogenica e il crosstalk epitelio–stroma, rendendo Bsg un nodo utile per lo studio di infiammazione, fibrosi e interazioni tumore–stroma. Un’attività alterata di CD147 è stata associata a un turnover patologico della matrice e a fenotipi invasivi, conferendo rilevanza meccanicistica in modelli di biologia cardiopolmonare, renale e oncologica.

EMMPRIN/CD147 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Bsg senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EMMPRIN/CD147 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Bsg nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Bsg, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EMMPRIN/CD147. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Bsg nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EMMPRIN/CD147 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EMMPRIN/CD147 nelle cellule tumorali con espressione di Bsg silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.