EMAP II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420161

Panoramica

Aimp1 codifica EMAP II (endothelial monocyte-activating polypeptide II), una proteina multifunzionale nota soprattutto come fattore di tipo citochinico derivato dal componente AIMP1 del complesso multi-sintetasi del tRNA. EMAP II partecipa alla segnalazione da stress e infiammatoria, modulando la chemiotassi dei leucociti, le risposte endoteliali e, più in generale, la regolazione dei processi dell’immunità innata. Nei modelli murini, un’alterata attività di Aimp1/EMAP II è stata collegata a vie che controllano l’apoptosi, la segnalazione correlata all’angiogenesi e il rimodellamento tissutale. La disregolazione di questi processi è rilevante per gli studi sull’infiammazione cronica, sulla biologia del microambiente tumorale–immune e sui meccanismi di disfunzione vascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EMAP II (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aimp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aimp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aimp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EMAP II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aimp1 per lo studio della segnalazione di EMAP II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aimp1 critici per la funzione di EMAP II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aimp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EMAP II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EMAP II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aimp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EMAP II Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EMAP II (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aimp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aimp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.