ELL3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405835

Panoramica

ELL3 (eleven-nineteen lysine-rich leukemia gene 3) codifica una proteina simile a un fattore di elongazione della trascrizione, appartenente alla famiglia ELL, che interagisce con l’RNA polimerasi II influenzando l’elongazione produttiva e la quantità di trascritti prodotti. Sebbene sia meno caratterizzato rispetto ad altri paraloghi di ELL, ELL3 è implicato nella regolazione di programmi di espressione genica legati all’identità cellulare, alla differenziazione e alla tempistica dello sviluppo, attraverso la modulazione delle dinamiche trascrizionali. Un controllo alterato dell’elongazione e del processamento dell’RNA è una caratteristica ricorrente della deregolazione oncogenica e dello sviluppo; per questo ELL3 rappresenta un bersaglio rilevante per studiare come la macchina trascrizionale contribuisca a un’espressione genica aberrante. Nelle cellule umane, lo studio della funzione di ELL3 può chiarire meccanismi di controllo trascrizionale dipendenti dal contesto e le sue possibili connessioni con firme di espressione associate a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ELL3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ELL3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELL3 per lo studio della segnalazione di ELL3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELL3 critici per la funzione di ELL3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELL3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ELL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ELL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ELL3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ELL3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.