ELL CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404799-ACT

Humanes ELL kodiert einen Elongationsfaktor der RNA‑Polymerase II, der die Prozessivität der Transkription erhöht und dazu beiträgt, die produktive Elongation während der Genexpression zu koordinieren. ELL ist an Transkriptionskontrollprogrammen beteiligt, die über die Regulation der promotorproximalen Pausierung und elongationsassoziierter Kontrollpunkte den Zellzyklusverlauf, die Differenzierung und zelluläre Stressantworten beeinflussen. Eine Dysregulation der ELL‑abhängigen Transkriptionselongation ist mit veränderter Expression von Wachstums- und Linienprogrammen verbunden, und ELL wurde durch wiederkehrende Fusionsereignisse und aberrante Rekrutierung von Kofaktoren mit onkogenen Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht. Daher wird ELL häufig im Hinblick auf seine Rolle für Transkriptionsfidelität, chromatinassoziierte Regulation und krankheitsrelevantes Remodeling der Genexpression untersucht.

ELL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ELL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ELL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ELL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ELL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ELL-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ELL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ELL-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ELL-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ELL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.