ELFN1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405274-ACT

ELFN1 (extracellular leucine-rich repeat and fibronectin type III domain containing 1) codifica una proteina postsinaptica simile a una molecola di adesione cellulare, arricchita nel sistema nervoso, che contribuisce a specificare l’abbinamento tra partner sinaptici e a modulare la neurotrasmissione. ELFN1 influenza l’organizzazione trans-sinaptica e la probabilità di rilascio presinaptico, contribuendo alla formazione e alla regolazione funzionale di microcircuiti inibitori definiti. Attraverso interazioni nella fessura sinaptica, è collegata a vie che regolano lo sviluppo delle sinapsi, la connettività neuronale e la plasticità dipendente dall’attività. Alterazioni dell’espressione di ELFN1 o variazioni regolatorie sono state associate, in studi genetici e di espressione, a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a supporto della sua rilevanza per la neuroscienza meccanicistica e la ricerca di modellizzazione delle malattie.

ELFN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ELFN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ELFN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ELFN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ELFN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ELFN1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ELFN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ELFN1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ELFN1 nelle cellule tumorali con espressione di ELFN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.