eIF4H Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411056

Panoramica

EIF4H codifica il fattore umano di inizio della traduzione eIF4H, una proteina accessoria che coopera con eIF4A per stimolare l’attività di elicasi dell’RNA dipendente da ATP e favorire lo scanning attraverso regioni 5′ UTR strutturate durante l’inizio della traduzione cap-dipendente. Modulando il reclutamento dei ribosomi e l’efficienza traduttiva specifica per mRNA, eIF4H contribuisce a plasmare l’output del proteoma in risposta a segnali di crescita e stress cellulare, collegando la funzione di EIF4H alla regolazione di proliferazione, differenziamento e programmi di adattamento allo stress. La disregolazione dei componenti dell’inizio della traduzione, incluso eIF4H, è stata associata a un’espressione alterata di vie oncogeniche e di sopravvivenza ed è frequentemente studiata in contesti quali biologia dei tumori, neurobiologia e controllo della traduzione virus–ospite. La perturbazione di EIF4H costituisce quindi un utile punto di ingresso per analizzare i meccanismi di controllo traduttivo e le loro conseguenze a valle sulla segnalazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4H (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EIF4H in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EIF4H insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EIF4H a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF4H.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EIF4H per lo studio della segnalazione di eIF4H, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EIF4H critici per la funzione di eIF4H
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EIF4H per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF4H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal eIF4H CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EIF4H. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF4H Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR eIF4H (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EIF4H per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EIF4H definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.