eIF4E2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403245-NIC

EIF4E2 codifica eIF4E2 (nota anche come 4EHP), un fattore di inizio della traduzione legante il cap che modula il destino degli mRNA competendo con eIF4E per il cap 5′ m7G e coordinando una repressione traduttiva selettiva. eIF4E2 agisce nella regolazione genica post-trascrizionale attraverso interazioni con complessi effettrici leganti l’RNA e con complessi mediati da miRNA, influenzando la stabilità degli mRNA e il reclutamento dei ribosomi in vie che controllano sviluppo, differenziamento e risposte allo stress. È stata inoltre associata a programmi traduttivi adattativi all’ipossia e alla proteostasi, modulando la sintesi di proteine coinvolte nella sopravvivenza cellulare e nel metabolismo. Un controllo deregolato della traduzione cap-dipendente che coinvolge reti associate a eIF4E2 è rilevante per studi di biologia tumorale, neurobiologia e adattamento cellulare allo stress, nei quali un’alterata selettività traduttiva può rimodellare gli output dell’espressione genica.

eIF4E2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF4E2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF4E2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF4E2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF4E2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.