eIF4AIII Plasmide Double Nickase (h): sc-402660-NIC

EIF4A3 codifica eIF4AIII, un’elicasi dell’RNA di tipo DEAD-box che funge da componente centrale del complesso di giunzione degli esoni (exon junction complex), collegando lo splicing del pre-mRNA ai processi a valle di esportazione, localizzazione e traduzione dell’mRNA, nonché alla degradazione mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated decay). Legandosi all’RNA in modo dipendente dall’ATP, eIF4AIII contribuisce a definire l’architettura delle particelle ribonucleoproteiche dell’mRNA dopo lo splicing e influenza la sorveglianza dei trascritti e la fedeltà del proteoma. Alterazioni della funzione o dell’espressione di EIF4A3 sono state associate a programmi di processamento dell’RNA deregolati, rilevanti per fenotipi del neurosviluppo e per cambiamenti dell’espressione genica associati al cancro. Di conseguenza, EIF4A3 è spesso studiato nei percorsi che regolano il metabolismo dell’RNA, gli esiti di splicing su scala genomica e il controllo della traduzione in risposta allo stress.

eIF4AIII Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF4A3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF4A3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF4A3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF4A3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.