eIF2C Plasmide Double Nickase (h): sc-400813-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF2C Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF2C Double Nickase Plasmid (h) e il eIF2C Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AGO2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF2C Antibody (B-3): sc-376696
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF2C Plasmide Double Nickase (h) | sc-400813-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2C Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400813-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGO2 umano (eIF2C2) codifica Argonaute 2, il nucleo catalitico del complesso di silenziamento indotto dall’RNA (RISC), che lega piccoli RNA e dirige una regolazione genica post-trascrizionale specifica di sequenza. AGO2 media l’attività endonucleolitica di “slicer” su determinati bersagli di siRNA e miRNA, contribuendo alla scissione dell’mRNA, alla repressione della traduzione e alla degradazione dell’mRNA. Attraverso queste funzioni modella vie che controllano proliferazione, differenziamento, risposte antivirali innate e programmi di adattamento allo stress. Un’espressione deregolata di AGO2 o un’attività alterata del RISC è stata associata a modificazioni delle reti di miRNA osservate in molteplici tumori e disturbi neurologici, a sostegno del suo impiego come nodo meccanicistico per lo studio del silenziamento dell’RNA e dei circuiti di regolazione genica.
eIF2C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGO2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGO2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGO2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGO2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.