eIF2A Plasmide Double Nickase (m): sc-432849-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF2A Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF2A Double Nickase Plasmid (m) e il eIF2A Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Eif2a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF2A Antibody (3A7A8): sc-517214
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF2A Plasmide Double Nickase (m) | sc-432849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2A Plasmide Double Nickase (m2) | sc-432849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Eif2a codifica eIF2A, un fattore alternativo di inizio della traduzione che facilita la consegna del Met-tRNA iniziatore al ribosoma in condizioni in cui l’attività del fattore canonico eIF2 è limitata. eIF2A contribuisce al controllo della traduzione durante lo stress cellulare, intersecando la segnalazione della risposta integrata allo stress (ISR) e programmi di traduzione selettiva che aiutano a rimodellare la proteostasi. Modulando il modo in cui le cellule avviano la sintesi proteica durante la limitazione di nutrienti, lo stress del RE o altre perturbazioni, Eif2a influenza vie che regolano sopravvivenza, differenziamento e adattamento. Un’alterata regolazione dell’inizio della traduzione e della sintesi proteica responsiva allo stress è ampiamente rilevante per la neurodegenerazione, la disfunzione metabolica e la biologia del cancro, rendendo Eif2a un nodo utile per studi meccanicistici dell’espressione genica accoppiata allo stress.
eIF2A Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Eif2a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Eif2a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Eif2a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Eif2a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.