eIF2α Plasmide Double Nickase (h): sc-400199-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF2α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF2α Double Nickase Plasmid (h) e il eIF2α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF2S1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF2α Antibody (D-3): sc-133132
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF2α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400199-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400199-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2S1 codifica la subunità alfa del fattore eucariotico di inizio della traduzione 2 (eIF2α), un regolatore centrale dell’avvio della traduzione cap-dipendente e un nodo chiave della risposta integrata allo stress. La fosforilazione di eIF2α in Ser51 da parte di chinasi sensibili allo stress come PERK (EIF2AK3), GCN2 (EIF2AK4), PKR (EIF2AK2) e HRI (EIF2AK1) riduce la disponibilità del complesso ternario, attenuando globalmente la sintesi proteica e al contempo consentendo programmi di traduzione selettivi. Questo asse di segnalazione coordina la proteostasi, l’adattamento allo stress del RE, l’autofagia e le risposte immunitarie innate tramite effettori a valle, tra cui ATF4 e CHOP/DDIT3. Una segnalazione di eIF2α disregolata è implicata in contesti quali neurodegenerazione, tolleranza allo stress delle cellule tumorali, risposte alle infezioni virali e stress metabolico, rendendo EIF2S1 un bersaglio ampiamente utilizzato per studiare i meccanismi di controllo della traduzione.
eIF2α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF2S1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF2S1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF2S1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF2S1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.