EHZF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432523

Panoramica

Zfp521 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco EHZF, un regolatore nucleare coinvolto nel coordinare l’impegno di linea e i programmi di espressione genica dello sviluppo nelle cellule di topo. EHZF modula reti trascrizionali implicate nel mantenimento dei progenitori e nella differenziazione, con interazioni riportate con vie di segnalazione che governano le decisioni di destino osteogenico, ematopoietico e neurale. Attraverso interazioni dipendenti dal contesto con cofattori associati alla cromatina, Zfp521 influenza lo stato epigenetico, la progressione del ciclo cellulare e la maturazione di tipi cellulari specializzati. Un’attività deregolata di Zfp521 è stata associata in letteratura a fenotipi di differenziazione e proliferazione alterati, rilevanti per la modellizzazione di anomalie dello sviluppo e della trasformazione oncogenica in sistemi sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EHZF (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Zfp521 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Zfp521 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Zfp521 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EHZF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Zfp521 per lo studio della segnalazione di EHZF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Zfp521 critici per la funzione di EHZF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Zfp521 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EHZF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EHZF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Zfp521. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EHZF Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EHZF (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Zfp521 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Zfp521 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.