EHMT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402460

Panoramica

EHMT1 (euchromatic histone lysine methyltransferase 1) codifica una metiltransferasi contenente un dominio SET che catalizza principalmente la mono- e dimetilazione della lisina 9 dell’istone H3 (H3K9me1/2), promuovendo la repressione trascrizionale all’interno dell’eucromatina. Come parte di complessi di regolazione epigenetica con partner quali EHMT2/G9a, EHMT1 contribuisce a modellare l’accessibilità della cromatina, a coordinare programmi di espressione genica specifici di linea e a stabilizzare l’identità cellulare durante sviluppo e differenziamento. La metilazione di H3K9 dipendente da EHMT1 si interfaccia con la metilazione del DNA e con l’organizzazione dell’eterocromatina, influenzando la stabilità del genoma e la regolazione genica a lungo raggio. La disregolazione dell’attività o del dosaggio di EHMT1 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e ad alterazioni dell’espressione genica neuronale, ed è studiata in contesti che includono la funzione sinaptica, le vie correlate alla cognizione e i meccanismi di malattia associati alla cromatina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EHMT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EHMT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EHMT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EHMT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EHMT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EHMT1 per lo studio della segnalazione di EHMT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EHMT1 critici per la funzione di EHMT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EHMT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EHMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EHMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EHMT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EHMT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EHMT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EHMT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EHMT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.