EGFL6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411850-ACT

EGFL6 (proteina 6 simile al fattore di crescita epidermico) è una proteina secreta associata alla matrice extracellulare, arricchita nei compartimenti vascolari e stromali, dove supporta le interazioni cellula–matrice e la comunicazione all’interno del microambiente tissutale. Attraverso le sue ripetizioni di tipo EGF, EGFL6 influenza i comportamenti delle cellule endoteliali e mesenchimali legati ad adesione, migrazione e rimodellamento angiogenico, processi che si intrecciano con la segnalazione delle integrine e con vie responsive ai fattori di crescita. Un’alterata espressione di EGFL6 è stata riportata in molteplici contesti tumorali e in altri disturbi caratterizzati da neovascolarizzazione aberrante e riprogrammazione della matrice extracellulare, rendendola un marker utile e un nodo funzionale per lo studio di fenotipi guidati dal microambiente. La ricerca su EGFL6 nell’uomo si concentra comunemente su come i segnali extracellulari rimodellino programmi trascrizionali che controllano invasività, pattern vascolare e organizzazione tissutale.

EGFL6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EGFL6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EGFL6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EGFL6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EGFL6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EGFL6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EGFL6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EGFL6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EGFL6 nelle cellule tumorali con espressione di EGFL6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.