EGFL11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406815

Panoramica

EYS codifica EGFL11, una grande proteina associata alla matrice extracellulare, arricchita nelle cellule fotorecettrici, dove contribuisce all’integrità strutturale e al mantenimento del segmento esterno della retina. EGFL11 contiene molteplici domini simili all’EGF, coerenti con un ruolo nelle interazioni proteina–proteina, nell’impalcatura extracellulare e nell’organizzazione dell’ambiente periciliare che sostiene il traffico ciliare e l’omeostasi della fototrasduzione. L’alterazione di EYS è fortemente associata a degenerazioni retiniche ereditarie, inclusa la retinite pigmentosa autosomica recessiva e fenotipi correlati caratterizzati da una disfunzione progressiva dei fotorecettori. Di conseguenza, EYS/EGFL11 è spesso studiato in relazione a vie che regolano il trasporto associato alle ciglia, l’organizzazione della matrice extracellulare e le risposte allo stress nelle cellule retiniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EGFL11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EYS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EYS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EYS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EGFL11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EYS per lo studio della segnalazione di EGFL11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EYS critici per la funzione di EGFL11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EYS per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EGFL11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EGFL11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EYS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EGFL11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EGFL11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EYS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EYS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.