EGFL11 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406815

Descripción general

EYS codifica EGFL11, una gran proteína asociada a la matriz extracelular enriquecida en las células fotorreceptoras, donde contribuye a la integridad estructural y al mantenimiento del segmento externo de la retina. EGFL11 contiene múltiples dominios tipo EGF, coherentes con funciones en interacciones proteína–proteína, andamiaje extracelular y organización del entorno periciliar que sostiene el tráfico ciliar y la homeostasis de la fototransducción. La alteración de EYS se asocia fuertemente con la degeneración retiniana hereditaria, incluida la retinitis pigmentosa autosómica recesiva y fenotipos relacionados caracterizados por una disfunción progresiva de los fotorreceptores. Como resultado, EYS/EGFL11 se estudia con frecuencia en vías que regulan el transporte asociado al cilio, la organización de la matriz extracelular y las respuestas al estrés en células retinianas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EGFL11 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EYS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EYS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EYS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EGFL11.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EYS para la investigación de la señalización de EGFL11, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EYS críticos para la función de EGFL11
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EYS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EGFL11 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EGFL11 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EYS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EGFL11 (h) y el plásmido HDR EGFL11 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EYS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EYS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.