EDG-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401366

Panoramica

S1PR3 (EDG-3) codifica un recettore accoppiato a proteine G per la sfingosina-1-fosfato che si associa a Gαi, Gαq e Gα12/13 per regolare la mobilizzazione del calcio, la segnalazione MAPK/ERK, l’attivazione delle GTPasi della famiglia Rho e il rimodellamento del citoscheletro. Attraverso queste vie, EDG-3 influenza la funzione di barriera endoteliale, il tono vascolare, il traffico leucocitario e la migrazione cellulare, integrando segnali lipidici extracellulari con programmi di segnalazione di adesione e infiammazione. Un’attività alterata di S1PR3 è stata associata a infiammazione disregolata e al rimodellamento vascolare, ed è spesso studiata in contesti quali aterosclerosi, fibrosi e interazioni tra tumore e microambiente. Queste caratteristiche rendono S1PR3 un bersaglio utile per analizzare le reti di segnalazione degli sfingolipidi in immunologia e biologia vascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene S1PR3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del S1PR3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto S1PR3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EDG-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di S1PR3 per lo studio della segnalazione di EDG-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni S1PR3 critici per la funzione di EDG-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di S1PR3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EDG-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EDG-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus S1PR3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EDG-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EDG-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia S1PR3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio S1PR3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.