EDG-1/S1P1/S1PR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400413-NIC

S1PR1 (EDG-1/S1P1) codifica un recettore accoppiato a proteine G per la sfingosina-1-fosfato che regola l'integrità della barriera endoteliale, la maturazione vascolare e il traffico delle cellule immunitarie. Il legame al recettore attiva una segnalazione dipendente da Gi con vie a valle PI3K–AKT, MAPK/ERK e GTPasi della famiglia Rho, che modulano la dinamica del citoscheletro, l'organizzazione delle giunzioni aderenti e le risposte chemiotattiche. In contesti ematopoietici e vascolari, S1PR1 contribuisce all'egresso dei linfociti, alla gemmazione angiogenica e al tono infiammatorio attraverso l'integrazione con reti di citochine e chemochine. Una segnalazione S1PR1 deregolata è stata associata ad alterazioni della permeabilità vascolare e dell'omeostasi immunitaria in studi su infiammazione, biologia cardiovascolare e microambiente tumorale, supportandone l'uso come nodo meccanicistico nella ricerca sulla segnalazione recettoriale.

EDG-1/S1P1/S1PR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus S1PR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di S1PR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di S1PR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con S1PR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.