Plasmide CRISPR d'Activation (h) Edc3: sc-402917-ACT

Le gène humain **EDC3** code Edc3, un activateur de la décapitation des ARNm conservé au cours de l’évolution, qui relie le complexe de décapitation **DCP1–DCP2** à d’autres répresseurs afin de favoriser la dégradation des transcrits. Edc3 agit dans les corps de traitement cytoplasmiques (P-bodies) et participe à la régulation post-transcriptionnelle de l’expression génique en couplant la répression de la traduction à la dégradation des ARNm de 5′ vers 3′, modulant ainsi l’abondance des ARN à l’état stationnaire et les programmes d’expression sensibles au stress. En contrôlant la stabilité des ARN, **EDC3** influence des voies impliquées dans la protéostasie, la signalisation innée de réponse au stress et les transitions d’état cellulaire qui nécessitent un remodelage rapide du transcriptome. Une dégradation des ARNm et une dynamique des P-bodies dérégulées sont largement impliquées dans la biologie des cancers et les maladies neurodégénératives, faisant d’**EDC3** un nœud pertinent pour des études mécanistiques du métabolisme des ARN dans des contextes liés aux maladies.

Edc3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EDC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Edc3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EDC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EDC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Edc3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EDC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Edc3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Edc3 dans les cellules tumorales présentant une expression de EDC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.