ECM2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-436571-ACT

Il gene murino *Ecm2* codifica la proteina 2 della matrice extracellulare (ECM2), un componente secreto e associato alla matrice, implicato nell’organizzazione dell’architettura stromale e nella modulazione delle interazioni cellula–matrice. ECM2 contribuisce ai processi di rimodellamento della matrice extracellulare che influenzano l’adesione e la migrazione cellulare, nonché la morfogenesi dei tessuti, intersecando vie che regolano l’attività dei fibroblasti e l’integrità della membrana basale. Le alterazioni della composizione della matrice e le dinamiche della matrice legate a ECM2 sono rilevanti negli studi sul rimodellamento di tipo fibrotico, sulla riparazione delle ferite e sulla biologia del microambiente tumorale, in cui i segnali stromali plasmano i fenotipi cellulari. L’espressione di *Ecm2* è quindi spesso analizzata in modelli di omeostasi del tessuto connettivo e di cambiamenti del microambiente extracellulare associati all’infiammazione.

ECM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ecm2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ECM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ecm2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ecm2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ECM2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ecm2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ECM2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ECM2 nelle cellule tumorali con espressione di Ecm2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.