ECM1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404321-NIC

ECM1 (extracellular matrix protein 1) è una glicoproteina secreta, arricchita nella matrice extracellulare associata alla membrana basale, ed è implicata nell’organizzazione dell’architettura tissutale attraverso interazioni con componenti strutturali e di segnalazione della matrice extracellulare (ECM). Contribuisce alla regolazione dell’adesione cellula–matrice, del rimodellamento della matrice extracellulare e dei segnali del microambiente che influenzano l’omeostasi epiteliale e i processi angiogenici. Un’espressione alterata di ECM1 è stata associata a una deregolazione della segnalazione stromale e a cambiamenti patologici in cute, mucose e altri tessuti, rendendola un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione extracellulare. In quanto fattore associato alla matrice, ECM1 è spesso studiata nel contesto del rimodellamento di tipo fibrotico, delle alterazioni tissutali legate all’infiammazione e della biologia del microambiente tumorale.

ECM1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ECM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ECM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ECM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ECM1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.