EBF3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402181-ACT

EBF3 (early B-cell factor 3) è un fattore di trascrizione di tipo helix–loop–helix che si lega al DNA per regolare programmi di espressione genica che controllano la differenziazione e la maturazione neuronale, oltre a pattern più ampi dello sviluppo. Nelle cellule umane, EBF3 contribuisce a reti trascrizionali che specificano il destino di linea e coopera con complessi della cromatina e cofattori per modellare le transizioni dello stato cellulare e la regolazione genica specifica di tessuto. Un’espressione o una funzione deregolata di EBF3 è stata collegata a fenotipi neuroevolutivi e a circuiti trascrizionali alterati osservati in diversi contesti patologici, rendendolo un nodo utile per interrogare le reti regolatorie geniche dello sviluppo. Lo studio delle vie dipendenti da EBF3 può chiarire come la tempistica trascrizionale e la selezione di promotori/enhancer influenzino le decisioni sul destino cellulare e la trascrizione in risposta allo stress.

EBF3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EBF3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EBF3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EBF3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EBF3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EBF3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EBF3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EBF3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EBF3 nelle cellule tumorali con espressione di EBF3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.