E-Selectin/CD62E/SELE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400452

Panoramica

SELE codifica per E-selectina (CD62E), una molecola di adesione inducibile delle cellule endoteliali, rapidamente sovraregolata da citochine infiammatorie come TNF-α e IL-1β. Legandosi a ligandi sialilati e fucosilati (incluso sialil-Lewis^x) presenti sui leucociti, l’E-selectina media l’ancoraggio e il rotolamento sull’endotelio attivato, avviando la cascata di adesione leucocitaria e la migrazione transendoteliale. La funzione di SELE si intreccia con la segnalazione infiammatoria guidata da NF-κB e regola il reclutamento vascolare dei leucociti, che modella l’infiammazione tissutale e la sorveglianza immunitaria. Un’espressione disregolata dell’E-selectina è associata a stati infiammatori cronici e a patologie vascolari, ed è spesso studiata nelle interazioni tumore–endotelio e in modelli di extravasazione rilevanti per la metastasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO E-Selectin/CD62E/SELE (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SELE in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SELE insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SELE a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina E-Selectin/CD62E/SELE.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SELE per lo studio della segnalazione di E-Selectin/CD62E/SELE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SELE critici per la funzione di E-Selectin/CD62E/SELE
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SELE per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SELE. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal E-Selectin/CD62E/SELE Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR E-Selectin/CD62E/SELE (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SELE per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SELE definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.