E-cadherin Plasmide Double Nickase (h): sc-400031-NIC

CDH1 codifica l’E-caderina, una proteina delle giunzioni aderenti dipendente da Ca2+ che media l’adesione omofilica cellula–cellula e mantiene la polarità epiteliale e l’architettura tissutale. Tramite il legame con β-catenina, p120-catenina e il citoscheletro di actina, l’E-caderina coordina il rimodellamento delle giunzioni, l’inibizione da contatto e la meccanotrasduzione, e modula indirettamente la segnalazione Wnt/β-catenina influenzando la disponibilità di β-catenina. L’alterazione di CDH1 compromette l’integrità della barriera epiteliale e promuove programmi di dedifferenziazione cellulare come la transizione epitelio–mesenchimale, processi frequentemente studiati nel contesto dell’invasione, di fenotipi associati alla metastasi e della morfogenesi tissutale alterata. La perdita o la disfunzione di CDH1 è ricorrente nei tumori epiteliali ed è anche implicata nel cancro gastrico diffuso ereditario, rendendolo un locus chiave per indagare la segnalazione dipendente dall’adesione e l’omeostasi epiteliale in modelli umani.

E-cadherin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDH1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.