Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynein IC1, axonemal (h): sc-411947

Présentation

DNAI1 code la chaîne intermédiaire 1 de la dynéine, un composant de la dynéine axonémale indispensable à l’assemblage et à la transmission de la force au sein des bras de dynéine externes, qui assurent le battement des cils motiles et des flagelles. En couplant l’activité motrice de la dynéine alimentée par l’ATP aux doublets de microtubules, la dynéine IC1 axonémale contribue à la génération coordonnée des ondes de battement ciliaire et aux processus de clairance mucociliaire. La fonction de DNAI1 recoupe des voies impliquées dans la biogenèse des cils, l’organisation de l’axonème et le maintien de la structure des cils motiles dépendant du transport intraflagellaire. Les altérations de DNAI1 sont associées à la dyskinésie ciliaire primitive, reliant une atteinte de l’intégrité de la dynéine axonémale à une motilité ciliaire déficiente et à des phénotypes développementaux et respiratoires en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynein IC1, axonemal (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNAI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNAI1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNAI1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dynein IC1, axonemal.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNAI1 pour l'étude de la signalisation de Dynein IC1, axonemal, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DNAI1 essentiels à la fonction de Dynein IC1, axonemal
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNAI1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dynein IC1, axonemal plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dynein IC1, axonemal plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNAI1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dynein IC1, axonemal plasmide HDR (h) et le Dynein IC1, axonemal (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNAI1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNAI1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.