Dynein IC1, axonemal Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411947

Panoramica

DNAI1 codifica la catena intermedia 1 della dineina, una componente della dineina assonemale necessaria per l’assemblaggio e la trasmissione della forza all’interno dei bracci di dineina esterni che alimentano il battito delle ciglia mobili e dei flagelli. Accoppiando l’attività motoria della dineina, guidata dall’ATP, ai doppietti di microtubuli, la Dynein IC1 assonemale contribuisce alla generazione coordinata della forma d’onda ciliare e ai processi di clearance mucociliare. La funzione di DNAI1 si interseca con vie che regolano la biogenesi delle ciglia, l’organizzazione assonemale e il mantenimento della struttura delle ciglia mobili dipendente dal trasporto intraflagellare. L’alterazione di DNAI1 è associata alla discinesia ciliare primitiva, collegando l’integrità compromessa della dineina assonemale a una ridotta motilità ciliare e ai conseguenti fenotipi di sviluppo e respiratori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynein IC1, axonemal (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DNAI1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DNAI1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DNAI1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dynein IC1, axonemal.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DNAI1 per lo studio della segnalazione di Dynein IC1, axonemal, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DNAI1 critici per la funzione di Dynein IC1, axonemal
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DNAI1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dynein IC1, axonemal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DNAI1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dynein IC1, axonemal Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dynein IC1, axonemal (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DNAI1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DNAI1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.