Dynein HC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400919

Panoramica

DYNC1H1 codifica la catena pesante della dineina citoplasmatica-1, un motore basato sui microtubuli che converte l’idrolisi dell’ATP in trasporto direzionale verso l’estremità meno. La catena pesante della dineina (HC) è fondamentale per il traffico intracellulare, il posizionamento degli organelli, la dinamica di endosomi e lisosomi, il trasporto assonale e l’assemblaggio e l’orientamento del fuso mitotico, attraverso un’attività coordinata con la dynactina e proteine adattatrici. Modellando il trasporto dipendente dai microtubuli e i processi di divisione cellulare, DYNC1H1 influenza il mantenimento neuronale, la polarità e le vie di proteostasi. L’alterazione genetica o la disfunzione della catena pesante della dineina è stata collegata a meccanismi di malattie del neurosviluppo e neuromuscolari, rendendola un bersaglio chiave per lo studio dei difetti di trasporto e delle risposte allo stress del citoscheletro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynein HC (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DYNC1H1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DYNC1H1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DYNC1H1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dynein HC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DYNC1H1 per lo studio della segnalazione di Dynein HC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DYNC1H1 critici per la funzione di Dynein HC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DYNC1H1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dynein HC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dynein HC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DYNC1H1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dynein HC Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dynein HC (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DYNC1H1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DYNC1H1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.