Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420081

Panoramica

Nel topo, **Dvl2** codifica **Dishevelled 2 (DVL2)**, una proteina citoplasmatica di scaffold che trasduce i segnali dai recettori **Frizzled** alle vie **Wnt** a valle. DVL2 integra la segnalazione Wnt canonica **Wnt/β-catenina** con le cascate non canoniche della **polarità planare cellulare (PCP)** e **Wnt/Ca²⁺**, coordinando complessi prossimali al recettore e regolando la dinamica del citoscheletro, la polarità e il traffico intracellulare. Attraverso questi ruoli, DVL2 contribuisce al patterning embrionale, al comportamento delle cellule staminali/progenitrici e all’omeostasi tissutale, e la sua deregolazione viene spesso studiata in contesti di segnalazione Wnt aberrante associata a difetti dello sviluppo e a programmi di segnalazione oncogenici. Dvl2 è anche oggetto di studio per gli effetti sulla migrazione cellulare e sulla morfogenesi, in cui è cruciale l’equilibrio tra la trascrizione dipendente da β-catenina e gli output della PCP.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dvl2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dvl2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dvl2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dvl2 per lo studio della segnalazione di Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dvl2 critici per la funzione di Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dvl2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dvl2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dvl2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dvl2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.