Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400785

Panoramica

DVL1 codifica Dishevelled 1 (Dvl-1), una fosfoproteina citoplasmatica che funge da impalcatura centrale nella trasduzione del segnale Wnt. Dvl-1 integra segnali prossimali al recettore provenienti da Frizzled e dai co-recettori per propagare sia la segnalazione dipendente dalla β-catenina (canonica) sia quella di polarità planare cellulare/Wnt–Ca²⁺ (non canonica), influenzando la polarità cellulare, la migrazione e i programmi trascrizionali. Attraverso i domini DIX, PDZ e DEP, Dvl-1 coordina complessi multiproteici che regolano la stabilizzazione della β-catenina, la segnalazione delle piccole GTPasi e il rimodellamento del citoscheletro. La disregolazione della segnalazione Wnt/Dishevelled è frequentemente associata ad alterazioni della patterning dello sviluppo e all’attivazione di vie oncogeniche, rendendo DVL1 un nodo rilevante per studi meccanicistici sul rimodellamento delle vie di segnalazione in contesti patologici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DVL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DVL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DVL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DVL1 per lo studio della segnalazione di Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DVL1 critici per la funzione di Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DVL1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DVL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DVL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DVL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.