DSPP Plasmide Double Nickase (h): sc-401195-NIC

La dentina sialofosfoproteina (DSPP) è un precursore secreto della matrice extracellulare che viene processato proteoliticamente in sialoproteina della dentina e fosfoproteina della dentina, componenti chiave che regolano la nucleazione dei minerali, la crescita dei cristalli e l’organizzazione della matrice nei tessuti mineralizzati. Negli odontoblasti, la DSPP contribuisce alla dentinogenesi coordinando la maturazione della matrice ricca di collagene e la deposizione di idrossiapatite, influenzando la gestione di calcio/fosfato e il rimodellamento della matrice extracellulare. Alterazioni dell’espressione o della sequenza di DSPP perturbano la dinamica di mineralizzazione della dentina e sono associate a difetti ereditari della dentina, rendendola un locus utile per studiare le relazioni genotipo–fenotipo nella biologia craniofacciale. La DSPP funge anche da marcatore di differenziamento odontogenico in modelli di cellule staminali e di sviluppo, nei quali i segnali della matrice extracellulare plasmano l’architettura dei tessuti.

DSPP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DSPP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DSPP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DSPP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DSPP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.