Plásmido CRISPR de Activación (h) DSPP: sc-401195-ACT

La sialofosfoproteína de la dentina (DSPP) es un precursor secretado de la matriz extracelular que se procesa proteolíticamente en sialoproteína de la dentina y fosfoproteína de la dentina, reguladores clave de la mineralización de la dentina y de la nucleación de hidroxiapatita. En los odontoblastos y en linajes mesenquimales craneofaciales relacionados, la DSPP contribuye a la organización de la matriz, al manejo del fosfato y a los procesos de depósito mineral que coordinan el desarrollo dental y la integridad estructural. Las alteraciones en la expresión o la función de DSPP se asocian con defectos hereditarios de la dentina, anomalías en la interfaz esmalte–dentina y fenotipos más amplios de mineralización craneofacial. Dado que DSPP integra la biología de la matriz extracelular con las vías de biomineralización, constituye una herramienta molecular útil para estudiar la diferenciación odontogénica, la maduración de la matriz y la dinámica del depósito mineral en modelos celulares humanos.

DSPP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DSPP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DSPP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DSPP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DSPP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DSPP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DSPP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DSPP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DSPP en células tumorales con expresión de DSPP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.