dsg3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401809

Panoramica

DSG3 codifica la desmogleina-3, una caderina desmosomiale che media l’adesione cellula-cellula dipendente dal calcio negli epiteli stratificati e sostiene l’integrità dei tessuti sotto stress meccanico. DSG3 interagisce con desmoplachina e plakoglobina per ancorare i filamenti intermedi e coordinare l’organizzazione delle giunzioni, collegando l’assemblaggio dei desmosomi al rimodellamento del citoscheletro e ai programmi di differenziazione epiteliale. Attraverso il suo ruolo nella segnalazione dipendente dall’adesione, DSG3 influenza processi quali la formazione della barriera, la polarità cellulare e la migrazione collettiva. Un’alterata espressione di DSG3 o il bersagliamento di desmogleina-3 da parte di autoanticorpi è stata associata a fragilità epiteliale e fenotipi con formazione di bolle; inoltre, la disregolazione dei componenti desmosomiali è frequentemente oggetto di studio nella biologia dei tumori epiteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO dsg3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DSG3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DSG3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DSG3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina dsg3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DSG3 per lo studio della segnalazione di dsg3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DSG3 critici per la funzione di dsg3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DSG3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal dsg3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal dsg3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DSG3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal dsg3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR dsg3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DSG3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DSG3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.