dsg2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400957-LAC

Il gene umano **DSG2** codifica la desmogleina-2 (dsg2), una caderina desmosomiale calcio-dipendente che media una forte adesione cellula–cellula nei tessuti epiteliali e cardiaci. dsg2 partecipa all’assemblaggio dei desmosomi e al rimodellamento delle giunzioni attraverso interazioni con plakoglobina, plakofiline e desmoplachina, collegando il complesso di caderine ai filamenti intermedi e sostenendo l’integrità tissutale sotto stress meccanico. Un’alterata espressione di DSG2 o una disfunzione desmosomiale è associata a compromissione della funzione di barriera, rimodellamento epiteliale legato all’infiammazione e difetti delle giunzioni tra cardiomiociti rilevanti per la cardiomiopatia aritmogenica. Queste proprietà rendono DSG2 un bersaglio chiave per lo studio della segnalazione dipendente dall’adesione, della meccanotrasduzione e della regolazione delle giunzioni in modelli di sviluppo e di malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale dsg2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DSG2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale dsg2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DSG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di dsg2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DSG2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.