DSC2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403386-ACT

Il gene umano **DSC2** codifica la **desmocollina-2**, una caderina desmosomiale calcio-dipendente che media l’adesione cellula-cellula e contribuisce all’integrità della barriera epiteliale e all’accoppiamento meccanico tra cellule adiacenti. DSC2 partecipa all’assemblaggio e alla stabilizzazione dei desmosomi attraverso interazioni con **plakoglobina**, **plakofiline** e **desmoplachina**, collegando i complessi giunzionali ai filamenti intermedi e coordinando l’architettura tissutale durante la differenziazione e in condizioni di stress. Un’espressione alterata di DSC2 o il rimodellamento dei desmosomi sono associati a un’adesione compromessa, a un crosstalk anomalo tra vie di segnalazione e a cambiamenti della motilità cellulare rilevanti per la patobiologia epiteliale. Poiché i desmosomi integrano funzioni strutturali e di segnalazione, DSC2 è spesso studiato in modelli di dinamica delle giunzioni, organizzazione del citoscheletro e omeostasi tissutale.

DSC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DSC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DSC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DSC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DSC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DSC2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DSC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DSC2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DSC2 nelle cellule tumorali con espressione di DSC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.