Drebrin Plasmide Double Nickase (h): sc-403241-NIC

DBN1 codifica la drebrina, una proteina legante l’actina arricchita nei neuroni che regola il rimodellamento del citoscheletro, la dinamica del cono di crescita e la morfologia delle spine dendritiche. La drebrina modula l’organizzazione dei filamenti di actina e collega la segnalazione sinaptica alla plasticità strutturale attraverso vie che governano l’adesione cellulare, la crescita dei neuriti e l’assemblaggio della densità postsinaptica. Alterazioni dell’espressione di DBN1 e della localizzazione della drebrina sono state associate a cambiamenti nella stabilità sinaptica e nella funzione dei circuiti, con correlazioni riportate con fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi. In contesti non neuronali, la drebrina contribuisce inoltre a processi dipendenti dall’actina, come la formazione di protrusioni di membrana e la motilità cellulare, supportando studi più ampi sulla regolazione del citoscheletro.

Drebrin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DBN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DBN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DBN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DBN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.