DRAK2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404787

Panoramica

STK17B codifica DRAK2, una chinasi serina/treonina della famiglia delle chinasi associate alla morte (death-associated protein kinases) che modula le soglie di segnalazione nelle cellule immunitarie. DRAK2 è collegata alla regolazione dell’attivazione dipendente dal recettore dei linfociti T (TCR), delle dinamiche della segnalazione del Ca2+ e dei programmi trascrizionali a valle che determinano proliferazione, risposte citochiniche e sopravvivenza. Attraverso queste funzioni, contribuisce al controllo dell’apoptosi e delle risposte allo stress cellulare, integrandosi con vie che influenzano l’omeostasi immunitaria e l’infiammazione. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di STK17B sono state associate a disregolazione immunitaria e a contesti di malattie infiammatorie, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici nella biologia dei leucociti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DRAK2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STK17B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STK17B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STK17B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DRAK2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STK17B per lo studio della segnalazione di DRAK2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STK17B critici per la funzione di DRAK2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STK17B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DRAK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DRAK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STK17B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DRAK2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DRAK2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STK17B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STK17B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.