DP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403331-ACT

Il gene umano **TFDP1** codifica **DP-1**, un fattore di trascrizione a specificità di sequenza che forma eterodimeri con i membri della famiglia **E2F** per regolare i geni necessari alla transizione **G1/S**, alla replicazione del DNA e alla progressione mitotica. I complessi DP-1/E2F integrano segnali provenienti dalla via di **RB** per coordinare l’ingresso nel ciclo cellulare, il controllo dei checkpoint e i programmi trascrizionali associati alla proliferazione. Attraverso il controllo del licensing della replicazione e dell’espressione genica della fase S, l’attività di TFDP1 influenza la stabilità del genoma e le risposte cellulari allo stress oncogenico. Una segnalazione TFDP1–E2F deregolata è spesso implicata nella biologia delle patologie guidate dalla proliferazione, rendendo DP-1 un nodo utile per studiare il controllo del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e il rimodellamento delle reti trascrizionali nelle cellule umane.

DP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TFDP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TFDP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TFDP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TFDP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DP-1 nelle cellule tumorali con espressione di TFDP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.