Dorfin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406860

Übersicht

RNF19A kodiert Dorfin, eine E3-Ubiquitin-Ligase der RBR-Familie, die an der ubiquitinabhängigen Proteinqualitätskontrolle und der Aufrechterhaltung der Proteostase beteiligt ist. Dorfin wirkt an der Erkennung und Ubiquitinierung fehlgefalteter oder aggregationsanfälliger Substrate mit und verknüpft Stressantworten des endoplasmatischen Retikulums mit zytosolischen Abbauwegen, um die zelluläre Homöostase zu erhalten. Durch die Regulation der Ubiquitin-Signalgebung und des Abbaus neuronaler und stressassoziierter Proteine wurde RNF19A im Kontext von Neurodegeneration und anderen Erkrankungen untersucht, die durch Proteinaggregation und eine gestörte Proteostase gekennzeichnet sind. Seine Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen der ER-assoziierten Degradation, der autophagiebezogenen Clearance und stressinduzierten Signalnetzwerken.

Das Dorfin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RNF19A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RNF19A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RNF19A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dorfin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RNF19A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dorfin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RNF19A-Exone abzielen, die für die Dorfin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RNF19A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dorfin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dorfin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RNF19A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dorfin HDR-Plasmid (h) und Dorfin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RNF19A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RNF19A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.