Dnmt3L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424871

Panoramica

Dnmt3l codifica DNMT3L, un cofattore cataliticamente inattivo che stimola le metiltransferasi de novo del DNA DNMT3A e DNMT3B nello stabilire e mantenere i pattern di metilazione del DNA durante lo sviluppo. Nel topo, DNMT3L è altamente rilevante per la programmazione epigenetica della linea germinale, dove sostiene la metilazione dei retrotrasposoni e delle regioni di controllo dell’imprinting, contribuendo alla stabilità del genoma e alla regolazione genica specifica dell’origine parentale. Attraverso queste funzioni, DNMT3L si inserisce nelle vie di regolazione epigenetica che coordinano lo stato della cromatina, il silenziamento trascrizionale e la riprogrammazione associata alla meiosi. La deregolazione dei processi di metilazione associati a DNMT3L è collegata a difetti di imprinting, a un’alterata repressione dei trasposoni e a una più ampia instabilità dell’epigenoma, che può influenzare i fenotipi dello sviluppo e stati epigenetici rilevanti per le malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dnmt3L (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dnmt3l in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dnmt3l insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dnmt3l a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dnmt3L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dnmt3l per lo studio della segnalazione di Dnmt3L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dnmt3l critici per la funzione di Dnmt3L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dnmt3l per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dnmt3L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Dnmt3L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dnmt3l. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dnmt3L Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Dnmt3L (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dnmt3l per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dnmt3l definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.