Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Dnmt3b Double Nickase Plasmid (h): sc-400332-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dnmt3b Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dnmt3b Double-Nickase-Plasmid (h) und Dnmt3b Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DNMT3B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dnmt3b: sc-376043
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dnmt3b Double Nickase Plasmid (h) | sc-400332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dnmt3b Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNMT3B kodiert Dnmt3b, eine de-novo-DNA-Methyltransferase, die während der Entwicklung CpG-Methylierungsmuster etabliert und zur langfristigen epigenetischen Genregulation beiträgt. Dnmt3b wirkt in chromatinassoziierten Komplexen, um Transkriptionsprogramme zu formen, das genomische Imprinting zu beeinflussen und zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität beizutragen, indem es die Methylierung repetitiver Elemente moduliert. Seine Aktivität greift in die an die DNA-Replikation gekoppelte Methylierungsaufrechterhaltung und in breitere epigenetische Signalwege ein, die die Linienspezifizierung und Zellidentität steuern. Eine fehlregulierte DNMT3B-abhängige Methylierung ist mit aberranter Promotor-Methylierung und epigenomischer Instabilität verbunden, wie sie in mehreren krankheitsrelevanten zellulären Zuständen beobachtet wird.
Dnmt3b Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNMT3B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNMT3B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNMT3B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNMT3B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.