Dnmt3b Plasmide Double Nickase (h): sc-400332-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dnmt3b Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dnmt3b Double Nickase Plasmid (h) e il Dnmt3b Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNMT3B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dnmt3b Antibody (G-9): sc-376043
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dnmt3b Plasmide Double Nickase (h) | sc-400332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dnmt3b Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNMT3B codifica Dnmt3b, una DNA metiltransferasi de novo che stabilisce i pattern di metilazione dei CpG durante lo sviluppo e contribuisce alla regolazione epigenetica a lungo termine dell’espressione genica. Dnmt3b opera all’interno di complessi associati alla cromatina per plasmare i programmi trascrizionali, influenzare l’imprinting genomico e contribuire al mantenimento della stabilità del genoma modulando la metilazione degli elementi ripetitivi. La sua attività si interseca con il mantenimento della metilazione accoppiato alla replicazione del DNA e con vie epigenetiche più ampie che controllano la specificazione di linea e l’identità cellulare. Una metilazione dipendente da DNMT3B deregolata è associata a metilazione aberrante dei promotori e a instabilità epigenomica osservate in molteplici stati cellulari rilevanti per la malattia.
Dnmt3b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNMT3B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNMT3B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNMT3B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNMT3B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.