DnaJC3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405100-LAC

DNAJC3 codifica il co-chaperone residente nel reticolo endoplasmatico DnaJC3 (noto anche come p58IPK), un membro della famiglia Hsp40/DnaJ che modula l’omeostasi proteica durante lo stress del reticolo endoplasmatico. DnaJC3 partecipa alla risposta alle proteine non correttamente ripiegate (UPR) e attenua la segnalazione legata allo stress interagendo con PERK/EIF2AK3 e altri regolatori della traduzione e dell’attività chaperonica, contribuendo così a plasmare la proteostasi, la degradazione associata al RE (ERAD) e l’adattamento cellulare alle proteine mal ripiegate. Alterazioni della funzione di DNAJC3 sono state associate a una deregolazione della segnalazione di stress e a una maggiore vulnerabilità proteotossica, con rilevanza per fenotipi metabolici e neurodegenerativi riportati in studi genetici e meccanicistici. Queste proprietà rendono DNAJC3 un nodo utile per analizzare i circuiti dello stress del RE, il controllo della traduzione e il crosstalk tra la segnalazione UPR e le vie infiammatorie in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale DnaJC3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DNAJC3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DnaJC3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DNAJC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DnaJC3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DNAJC3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.