DnaJC3 Plasmide Double Nickase (m): sc-437172-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DnaJC3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DnaJC3 Double Nickase Plasmid (m) e il DnaJC3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Dnajc3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DnaJC3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-437172-NIC | 20 µg | $410.00 |
Dnajc3 codifica DnaJC3, un co‑chaperone associato al reticolo endoplasmatico (noto anche come P58IPK) che contribuisce a mantenere la proteostasi durante la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR). DnaJC3 modula le vie di risposta allo stress interagendo con i chaperoni della famiglia Hsp70 e regolando il braccio PERK–eIF2α dello stress del RE, influenzando così il controllo della traduzione e l’adattamento a condizioni proteotossiche. Grazie ai suoi ruoli nel controllo qualità del RE e nell’attenuazione della segnalazione delle chinasi dello stress, DnaJC3 è rilevante per la ricerca sulla funzione delle cellule secernenti, sull’infiammazione e sullo stress metabolico. L’alterata gestione dello stress del RE legata all’attività di DnaJC3 è spesso studiata in contesti quali l’omeostasi delle cellule β pancreatiche, lo squilibrio della proteostasi associato alla neurodegenerazione e, più in generale, fenotipi di risposta allo stress in modelli murini.
DnaJC3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dnajc3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dnajc3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dnajc3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dnajc3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.