DNAH5 Plasmide Double Nickase (h): sc-407034-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNAH5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNAH5 Double Nickase Plasmid (h) e il DNAH5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNAH5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNAH5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407034-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNAH5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407034-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAH5 codifica la catena pesante 5 della dineina assonemale, un componente motore fondamentale del braccio esterno della dineina che alimenta lo scorrimento dei microtubuli dipendente dall’ATP all’interno dell’assonema delle ciglia motili. Nell’epitelio delle vie aeree umane, nel tratto riproduttivo e nelle cellule ependimali, DNAH5 sostiene il battito ciliare coordinato necessario per la clearance mucociliare, il flusso dei fluidi e la definizione dell’asse corporeo sinistra–destra durante lo sviluppo. La sua funzione si integra con i processi di assemblaggio assonemale e di trasporto intraflagellare che mantengono l’ultrastruttura e la forma d’onda delle ciglia. Varianti con perdita di funzione in DNAH5 sono fortemente associate alla discinesia ciliare primaria, collegando la motilità ciliare compromessa a malattie respiratorie croniche, difetti di lateralità e ridotta fertilità.
DNAH5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNAH5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNAH5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNAH5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNAH5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.