DNA Ligase III Plasmide Double Nickase (h): sc-402841-NIC

LIG3 codifica la DNA ligasi III umana, una ligasi ATP-dipendente che sigilla le rotture a singolo filamento durante la riparazione per escissione di basi e coordina la riparazione del danno ossidativo al DNA tramite interazioni con XRCC1. La DNA ligasi III contribuisce inoltre all’unione alternativa delle estremità e partecipa a processi di mantenimento del genoma che proteggono le forcelle di replicazione e preservano la stabilità cromosomica. La sua isoforma mitocondriale sostiene la riparazione e l’integrità del DNA mitocondriale, collegando la funzione di LIG3 alla bioenergetica cellulare e alle risposte allo stress. La deregolazione o la perdita dell’attività di LIG3 è associata a un aumento della segnalazione di danno al DNA, a un maggiore carico mutazionale e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia del cancro e la ricerca sulle neurodegenerazioni.

DNA Ligase III Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LIG3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LIG3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LIG3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LIG3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.