DMXL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417505-ACT

DMXL2 (Dmx-like 2) codifica una grande proteina scaffold contenente ripetizioni WD, implicata nel traffico vescicolare e nell’esocitosi regolata, supportando la dinamica delle membrane nei compartimenti secretori e sinaptici. Coordinando le interazioni proteina–proteina all’interno delle vie endomembranose, DMXL2 è collegata alla funzione dei neuroni e delle cellule endocrine, inclusi i processi che accoppiano maturazione, docking e rilascio delle vescicole. Un’alterata espressione o funzione di DMXL2 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e a disfunzioni riproduttive/endocrine, rendendola rilevante per lo studio del controllo della via secretoria nelle cellule umane. In quanto regolatore del traffico di membrana ampiamente espresso, DMXL2 viene spesso analizzata in modelli di biologia sinaptica, secrezione ormonale e omeostasi cellulare.

DMXL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DMXL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DMXL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DMXL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DMXL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DMXL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DMXL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DMXL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DMXL2 nelle cellule tumorali con espressione di DMXL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.