DMBT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402615-ACT

DMBT1 (deleted in malignant brain tumors 1) codifica una glicoproteina secreta ricca di cisteine del tipo “scavenger receptor”, implicata nella differenziazione epiteliale e nell’immunità innata delle mucose. La proteina partecipa alle interazioni ospite–microbo legando ligandi associati ai patogeni e contribuisce al mantenimento della barriera attraverso ruoli nell’organizzazione della matrice extracellulare e nella regolazione dell’infiammazione. L’espressione di DMBT1 è modulata durante il danno tissutale e la riparazione ed è stata associata a programmi di rimodellamento dell’epitelio. Un’alterata regolazione di DMBT1 è stata riportata in molteplici tipi di tumore e condizioni infiammatorie, supportandone l’uso come punto di accesso molecolare per studiare il crosstalk tra tumore e microambiente e le vie di difesa mucosale.

DMBT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DMBT1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DMBT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DMBT1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DMBT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DMBT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DMBT1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DMBT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DMBT1 nelle cellule tumorali con espressione di DMBT1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.