Dlx-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405063-ACT

DLX3 codifica il fattore di trascrizione homeobox Dlx-3, un regolatore chiave delle interazioni epitelio–mesenchimali che coordina programmi genici coinvolti nel controllo della differenziazione epidermica, dello sviluppo del follicolo pilifero, dell’odontogenesi e della morfogenesi cranio-facciale. Dlx-3 partecipa a reti trascrizionali dello sviluppo insieme ad altri membri della famiglia DLX e si integra con segnali come BMP e WNT per modulare la specificazione di linea e la formazione della barriera. Nella genetica umana, un’alterata funzione di DLX3 è associata a fenotipi di displasia ectodermica, incluso la sindrome trico-dento-ossea, collegando il suo controllo trascrizionale a difetti dei capelli, dello smalto dentale e dell’omeostasi ossea. Queste caratteristiche rendono DLX3 un nodo rilevante per studiare stati della cromatina dipendenti dalla differenziazione, l’uso di enhancer specifici di tessuto e i circuiti di regolazione genica in cheratinociti e in modelli affini di progenitori.

Dlx-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DLX3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dlx-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DLX3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DLX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dlx-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DLX3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dlx-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dlx-3 nelle cellule tumorali con espressione di DLX3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.