DLST Plasmide Double Nickase (h): sc-409604-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DLST Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DLST Double Nickase Plasmid (h) e il DLST Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DLST. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DLST Plasmide Double Nickase (h) | sc-409604-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DLST Plasmide Double Nickase (h2) | sc-409604-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLST codifica la diidrolipoamide S-succiniltransferasi (E2) del complesso mitocondriale della 2-ossoglutarato deidrogenasi, un enzima cardine del ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA) che converte il 2-ossoglutarato in succinil-CoA. Catalizzando il trasferimento del gruppo succinile al CoA e coordinando il convogliamento del substrato dipendente dal lipoile, DLST sostiene il metabolismo ossidativo, la produzione di NADH e l’omeostasi redox mitocondriale. L’attività di DLST si interfaccia con anaplerosi/cataplerosi e regola la disponibilità di intermedi del TCA utilizzati per la biosintesi, incluso il succinil-CoA per l’eme e per la succinilazione delle proteine. Alterazioni della funzione di DLST sono state associate a disfunzione metabolica mitocondriale e sono state implicate in contesti in cui risultano perturbate la respirazione mitocondriale, le risposte allo stress ossidativo e il metabolismo proliferativo.
DLST Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DLST nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DLST. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DLST. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DLST interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.