Dkk-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420004-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dkk-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Dkk-1 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Dkk-1 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Dkk-1 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Dkk1. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dkk-1 Antibody (B-7): sc-374574
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dkk-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-420004-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Dkk-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m2) | sc-420004-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene Dkk1 del topo codifica Dickkopf-1 (Dkk-1), un antagonista secreto della segnalazione canonica Wnt/β-catenina che si lega a LRP5/6 e limita i programmi trascrizionali guidati da Wnt. Modulando l’attività di Wnt, Dkk-1 influenza il patterning embrionale, la differenziazione degli osteoblasti e l’omeostasi ossea, nonché il rimodellamento tissutale. Un’alterata espressione di Dkk1 è associata a una deregolazione dell’output della via Wnt osservata in contesti quali fenotipi scheletrici, segnalazione associata alla fibrosi e interazioni nel microambiente tumorale, rendendolo un nodo utile per la dissezione della via. Dkk1 è inoltre studiato per i suoi effetti sul comportamento di cellule staminali/progenitrici e per il cross-talk con reti infiammatorie e di fattori di crescita.
Dkk-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Dkk1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Dkk-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Dkk1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Dkk1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dkk-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Dkk1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dkk-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dkk-1 nelle cellule tumorali con espressione di Dkk1 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.