DISP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431923

概要

マウスのDisp2遺伝子にコードされるDispatched RNDトランスポーターファミリーメンバー2（DISP2）は、脂質修飾されたHedgehogリガンドの放出および細胞外での分布に関与するとされるDispatchedファミリーに関連した多回膜貫通型膜タンパク質です。Hedgehogモルフォゲンの利用可能性を調節することで、DISP2は、Hedgehog経路活性によって制御される発生パターニング、上皮–間葉間シグナル伝達、ならびに組織恒常性に影響を及ぼし得る位置づけにあります。Hedgehogシグナル伝達ダイナミクスの変化は、先天性発生異常やがんに伴うシグナル再配線の研究において重要であるため、Disp2は経路制御の解明に向けた有用な切り口となります。マウスモデルでは、Disp2の摂動を利用して、膜輸送過程がパラクリン性シグナル勾配や下流の転写出力をどのように形成するかを検討できます。

DISP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDisp2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Disp2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Disp2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DISP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DISP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Disp2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DISP2の機能に不可欠なDisp2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Disp2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DISP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDISP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Disp2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DISP2 HDRプラスミド（m）および DISP2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDisp2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDisp2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。