DISP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431923

Panoramica

Dispatched RND transporter family member 2 (DISP2), codificato dal gene murino *Disp2*, è una proteina di membrana multipasso correlata alla famiglia Dispatched, implicata nel rilascio e nella distribuzione extracellulare dei ligandi Hedgehog modificati da lipidi. Attraverso la modulazione della disponibilità del morfogeno Hedgehog, DISP2 è in grado di influenzare i programmi di patterning dello sviluppo, la segnalazione epitelio–mesenchimale e l’omeostasi tissutale governate dall’attività della via Hedgehog. Le alterazioni della dinamica di segnalazione Hedgehog sono rilevanti per lo studio di anomalie congenite dello sviluppo e della riprogrammazione della segnalazione associata al cancro, rendendo *Disp2* un utile punto di partenza per analizzare la regolazione della via. Nei modelli murini, la perturbazione di *Disp2* può essere sfruttata per indagare come i processi di trasporto di membrana plasmino gradienti di segnalazione paracrina e i conseguenti output trascrizionali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DISP2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Disp2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Disp2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Disp2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DISP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Disp2 per lo studio della segnalazione di DISP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Disp2 critici per la funzione di DISP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Disp2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DISP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DISP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Disp2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DISP2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DISP2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Disp2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Disp2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.